黄晓龙有关物质 【求助】有关物质方法学问题

有关物质(特殊杂质)的检查 有关物质是指药物中可能存在的残留的合成原料、中间体、降解物、聚合体、副反应产物和降解产物等特殊杂质,这些杂质的结构往往是未知的,但一般与主药类似或与主药有一定的渊源。 有关物质包括已知杂质和未知杂质,多用HPLC法对其进行检查。

其中,已知杂质且杂质对照品可获得的,可用内标法加校正因子测定法和外标法检查,其方法学研究与主成分含量测定类似;未知杂质和杂质对照品不可获得的通常采用主成分自身对照法进行检查,即将供试品溶液色谱图中的杂质峰面积与主成分自身稀释对照液的主峰峰面积进行比较,以确定杂质限度是否合格。

该法的前提是待检查的杂质与主成分在确定的检测波长下有相近的紫外吸收(响应值接近)。

当杂质中既有已知杂质又有未知杂质时,已知杂质的检查可采用加校正因子的主成分自身对照测定法,未知杂质可采用不加校正因子的主成分自身对照测定法。若不同杂质难于找到均适宜的检测波长,可选择在不同波长下分别测定。

主成分自身对照法检查有关物质适用于对微量杂质总量的控制,也可用于单个杂质的限度(一般不超过0.5%)控制。 有关物质检查的方法学研究: 1、溶解度、紫外光谱等的考察 进行有关物质检查前,通常需考察样品在水、甲醇、乙腈、乙酸乙酯等常用溶剂中的溶解度,即有利于选择配溶液用的溶剂,也可大概了解样品极性的大小。

另外,还可考察样品在水、甲醇、乙腈、乙酸乙酯等常用溶剂中的紫外光谱,选择所有溶剂中吸收都较大的吸收波长作为选择流动相的检测波长。

2、流动相的选择 选择流动相时,可考察不同流动相条件下主峰的理论板数、主峰与各杂质峰的分离度、各杂质峰之间的分离度、主峰和主要杂质峰的拖尾因子等。其中的杂质包括残留的合成原料、中间体、降解物、聚合体、副反应产物和降解产物等,实际操作时,如能得到杂质,可将杂质加入到样品溶液中,然后考察主峰的理论板数、主峰与各杂质峰的分离度、各杂质峰之间的分离度、主峰和主要杂质峰的拖尾因子等;不能得到杂质时,可采用破坏性试验进行考察。

目前,在流动相筛选及方法学验证中,采用强力破坏以获得各种降解产物,并考查各降解产物与主药分离度的方法已被申报单位接受并认同,易被忽视的是对合成用原料、中间体与主药间分离度的考察。

3、检测波长的选择 有关物质的检查包括对残留的合成原料、中间体、降解物、聚合体、副反应产物和降解产物等杂质的检查,这些杂质的紫外吸收可能与主药相同或相近,也可能不同。

已有国家标准的药品可直接参照国家标准做。选择有关物质的检测波长时需对产品中可能存在的杂质的紫外吸收进行研究。已知杂质可用流动相溶解进行扫描;未知杂质可通过二极管阵列检测器考察合成用原料、中间体、降解产物、主药的紫外吸收特征,或通过紫外扫描的方法考察上述各样品的紫外吸收,选择杂质与主药相近的响应值处的波长作为有关物质的检查波长。

对于响应值相差较大的杂质,应建立相应的检查方法及检测波长(可在不同波长下分别检查),或采用加校正因子的主成分自身对照法进行检查。

4、供试品溶液浓度的选择 一般情况下,杂质在药品中的含量比较低,检查有关物质时,若供试品溶液的浓度太低,可能会导致某些杂质检测不到。

所以,检查有关物质时需考察供试品溶液的浓度。具体操作时,可逐渐增加供试品溶液的浓度直到没有新的杂质峰出现为止。 5、系统适用性试验 系统适用性包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等数据。有关物质检查时主要测定的是杂质,所以有关物质检查的系统适用性试验主要考察主峰的理论板数、主峰与各杂质峰的分离度、各杂质峰之间的分离度、主峰和主要杂质峰的拖尾因子等。

具体操作如下:1、配制供试品溶液;2、配制主成分对照品和各杂质对照品的混合溶液;3、配制相当于供试品溶液浓度1%的主成分自身稀释对照溶液。

然后取上述溶液1或2或3,重复进样6次,计算主峰的理论板数,主峰与各杂质峰的分离度,各杂质峰之间的分离度,主峰和主要杂质峰的拖尾因子,主峰、各主要杂质峰和总杂质峰的RSD,都应符合要求。

6、专属性 专属性试验可参考含量测定的专属性验证,不过,有关物质检查的专属性侧重于杂质,即考察溶剂、辅料等不干扰杂质的测定,主成分峰或需定量的杂质峰应与其它峰完全分离。

7、线性关系的考察 已知杂质采用杂质对照品进行线性关系的考察;未知杂质可采用主成分对照品进行考察,取主成分对照品,配制成一定浓度(大于自身对照浓度)的贮备液,然后精密稀释成相对于自身对照液浓度50%、75%、100%、125%、150%的系列溶液,或分别精密称样,制备一系列被测物质浓度系列进行测定,至少制备 6 个浓度。

取上述溶液进样,记录色谱图,计算回归方程。

8、检测限与定量限 已知杂质采用杂质对照品考察检测限与定量限;未知杂质可采用主成分对照品进行考察,取主成分对照品,加溶剂稀释至很小浓度,进样,记录图谱,观察信噪比。信噪比10:1为定量限;信噪比3:1为检测限。

另外,还可配制6份最低定量限浓度的溶液,所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%,峰面积的相对标准差应不大于5.0%。 9、精密度 参考含量测定的精密度试验,考察重复性和中间精密度,计算样品溶液中主峰、各主要杂质峰和总杂质含量的RSD,应符合规定。

10、溶液稳定性 参考含量测定的溶液稳定性试验,计算样品溶液、对照溶液中主峰、各主要杂质峰和总杂质峰面积的RSD,应符合规定。

11、准确度 已知杂质需做准确度验证,具体操作参考含量测定的准确度验证,如某杂质的限度为0.2%,取已知杂质含量的样品(重复性试验已测出杂质的含量)适量,9份,分别加入0.1%、0.

2%和0.3%的杂质对照品(各三份),稀释到有关物质供试品溶液浓度。每个样品进一针,记录色谱图;另取杂质对照品,按照标准配制成杂质对照品溶液,进样,记录色谱图。按外标法以峰面积计算回收率。该项目的可接受的标准为:各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间,如杂质的浓度为定量限,则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%,相对标准差应不大于10%。

未知杂质可不做准确度验证。 12、系统耐用性 具体操作参考含量测定的系统耐用性,分别考察各个条件下主峰、杂质峰的系统适用性和各个条件下主峰、杂质峰及总杂质峰的含量,并计算RSD,应符合规定。

13、有关物质检查 主成分自身稀释对照法检查有关物质的具体操作如下: 精密称(量)取本品一定量,置100ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;精密量取上述供试品溶液1-2ml,置100ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液;取对照溶液20微升注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%-20%,再精密量取供试品溶液与对照溶液各20微升,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2-3倍。

供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰峰面积,各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰峰面积的2倍。 以上纯属个人理解、总结,仅供参考,欢迎批评指正QQ258582837