单核细胞增生李斯特菌
(1)在225mL的Fraser基础肉汤中分别加入2.25mL无菌氯化锂溶液、0J3mL尤菌萘啶酮酸钠盐溶液、1.12mL无菌吖啶黄溶液和2.25mL无菌柠檬酸铁铵溶液(详见附 录1中培养基及其无菌添加物)。混合后制成50%的Fraser肉汤,加人样品后置于30C 培养Mh,进行初增菌。
(2)①将一环增菌培养物划线于牛津琼脂上,另取一环接种于PALCAM琼脂上平板在35℃或37℃培养48h(牛津琼脂平板在需氧条件下培养,PALCAM琼脂平板在第 10.1中描述的微生物需氧条件下培养)。
②将0.1mL增菌肉汤转接到装有10mL Freser基础肉扬的试管中,置于35℃或 37℃培养48h,进行二次增菌。
(3)按(2)①中的方法转接二次增菌液于牛津琼脂平板和PALCAM平板。
使用适当的ELISA试剂盒可以对初次和二次增菌液进行快速检测,从而对单核细胞增生李斯特菌进行快速筛(如TECRA李斯特菌可视免疫测定法)。
(1) 李斯特菌能水解七叶苷,除格氏李斯特菌外,其他李斯特菌均不能分解甘露醇产酸。在牛津琼脂平板上,李斯特菌菌落直径为23mm,带有黑褐色或黑色晕轮(七叶苷水解所形成),菌落的中心经常是下凹的;在PALCAM琼脂匕李斯特菌菌落直径为 1.5lnm,绿色并带有黑色的晕轮(或菌落中心为黑色)。
(2)验证时,挑取5个典型的菌落,每个菌落划线接种到胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(TSYEA)上,置于MT:或37T:需氧培养2448h,分离平板上的单个菌落以确保菌株的 纯度。
(3)检查TSYEA平板上生氏的单个菌落,使用亨利描述的菌落特征进行分离亨利认为李斯特菌在TYS平板上生成细小的、半透明的菌落,菌落呈蓝色、蓝绿 色或蓝灰色,菌落表面为细小的颗粒状,类似于粗糙的磨砂玻璃。
从TSYES平板上挑取一个单个的菌落,分别接种于胰蛋白胨大豆酵母浸膏肉汤 (TSYEB)试管和胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(TSYEA)斜面上,25C培养1824h。
(4)①ffllSYEK肉汤培养物进行菌体运动试验和革兰氏染色。李斯特菌属呈翻筋斗运动,注意与振荡培养后非致病性李斯特菌的快速直线运动进行区别。李斯特菌为小的、革兰氏阳性的、无孢子的短杆菌。
