【神经递质受体】小鼠神经递质受体PCR芯片
小鼠神经递质受体PCR芯片运用高通量荧光定量PCR方法,在一张96孔或384孔板上同时对某个信号通路或疾病相关基因的表达量变化进行检测,芯片上的基因包括了与研究对象有确定关系的基因或者待考证的基因;目前启因生物针对不同的信号通路和疾病相关基因设计了150多款功能分类PCR芯片,涵盖生命科学研究的各个领域。
小鼠神经递质受体PCR ARRAY含有84个小鼠神经递质受体基因,包括:肾上腺素受体,胆碱能受体,GABA能受体,谷氨酸受体及其他神经递质受体等。神经递质受体与调控因子RT²Pr ofiler™PCR Array包含84个调控神经递质生物合成、摄入、转运及信号传递等生物过程的基因。
芯片中包含神经递质特异性受体,例如:乙酰胆碱、苯二氮、多巴胺、伽马氨基丁酸(GABA)、谷氨酸、五羟色胺、生长抑素和神经肽等。
调控神经递质水平的基因也包含其中。利用实时定量PCR,你可以方便并且可信地对与神经系统相关的基因进行同时检测。脑内神经递质分为四类,即生物原胺类、氨基酸类、肽类、其它类。生物原胺类神经递质是最先发现的一类,包括:多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA,NE)、肾上腺素(AD)、5-羟色胺(5-HT)也称(血清素)。
氨基酸类神经递质包括:γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸、谷氨酸、组胺、乙酰胆碱(Ach)。肽类神经递质分为:内源性阿片肽、P物质、神经加压素、胆囊收缩素(CCK)、生成抑素、血管加压素和缩宫素、神经肽y。其它神经递质分为:核苷酸类、花生酸碱、阿南德酰胺、sigma受体(σ受体)。
重要的神经递质和调质有:
①乙酰胆碱。最早被鉴定的递质。脊椎动物骨骼肌神经肌肉接头、某些低等动物如软体、环节和扁形动物等的运动肌接头等,都是以乙酰胆碱为兴奋性递质。脊椎动物副交感神经与效应器之间的递质也是乙酰胆碱,但有的是兴奋性的(如在消化道),有的是抑制性的(如在心肌)。中国生理学家张锡钧和J.H.加德姆(1932)所开发的以蛙腹直肌标本定量测定乙酰胆碱的方法,对乙酰胆碱的研究起了重要作用,至今仍有应用价值。
②儿茶酚胺。包括去甲肾上腺素(NA)、肾上腺素(Ad)和多巴胺(DA)。交感神经节细胞与效应器之间的接头是以去甲肾上腺素为递质。
③5-羟色胺(5-HT)。5-羟色胺神经元主要集中在脑桥的中缝核群中,一般是抑制性的,但也有兴奋性的。中国一些学者的研究表明,在针刺镇痛中5-羟色胺起着重要作用。
④氨基酸递质。被确定为递质的有谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(Gly)。谷氨酸是甲壳类神经肌肉接头的递质。γ氨基丁酸首先是在螯虾螯肢开肌与抑制性神经纤维所形成的接头处发现的递质。后来证明γ-氨基丁酸也是中枢的抑制递质。以甘氨酸为递质的突触主要分布在脊髓中,也是抑制性递质。
⑤多肽类神经活性物质。近年来发现多种分子较小的肽具有神经活性,神经元中含有一些小肽,虽然还不能肯定它们是递质。如在消化道中存在的胰岛素、胰高血糖素和胆囊收缩素等都被证明也含于中枢神经元中。
小鼠神经递质受体PCR芯片可用于小鼠模型神经递质受体的表达基因研究:
制备并鉴定出具备符合经前期烦躁障碍(Premenstrual Dysphoric Disorder,PMDD)诊断首要标准的PMDD肝气郁病证属性的大鼠模型,并通过该病证大鼠模型研究,最终形成PMDD肝气郁病证大鼠模型造模和评价的技术方法。
同时,以模型为载体,检测各脑区神经递质含量变化及与发病密切相关受体基因和蛋白表达,初步探查其发病机制。方法:本研究采用动物行为实验与神经生化指标检测相结合的方法进行探讨。
(1)采用强迫游泳实验的方法,选取间期1期和接受期为测试点,依次进行间期1期、接受期、间期1期3次强迫游泳实验(FST),每次间隔2个周期即9天,筛选出悬浮不动时间等行为参数具有动情周期依赖性的大鼠;(2)对筛选出的大鼠行卵巢切除术后,这种行为表型消失;(3)对卵巢切除大鼠进行外源性性激素诱导人工周期,上病证行为表型又出现;(4)对以上诱导人工周期大鼠"模型"进行氟西汀和舒郁胶囊干预,观察悬浮不动时间等行为参数的动情周期依赖性消失现象,以严格科学证据,证明该病证大鼠模型属于PMDD肝气郁病证大鼠模型;(5)药物干预后采用ELSA试剂盒检测血清及部分脑区中5-HT、NE、GABA在各组间的含量变化,以及采用RT-PCR、western-blot方法检测GABAAR4α的基因和蛋白表达,以初步探查其神经生化机制。
[8]]朱德豪.强迫游泳应激诱导经前烦躁障碍(PMDD)肝气郁证大鼠模型的制备以及模型大鼠神经递质及其受体的变化[D].山东中医药大学,2016.
